体内碱性彗星试验在化合物遗传毒性评价中的应用日益广泛。ICH S2(R1) 已将肝脏彗星试验列为第 2 个组织/终点的体内试验;体内哺乳动物碱性彗星试验的指导原则(TG489)也已颁布。体内碱性彗星实验能够检测 DNA 链断裂、碱性不稳定位点、不完整切除修复引起的 DNA 链的断裂,能够制成合适细胞悬液的组织 DNA 损伤。与其他试验相比其检测的是单细胞水平的 DNA 损伤,因此该试验敏感性较高,操作简单,经济省时。
一、彗星试验原理
彗星试验(Comet Assay),亦称单细胞凝胶电泳试验,是一种通过检测DNA链损伤判断遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单、双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中,而核DNA由于相对分子质量太大只能留在原位。
在中性条件下,DNA片段可进入凝胶发生迁移,而在碱性电解质的作用下,DNA发生解螺旋,损伤的DNA断链及片段被释放出来。由于这些DNA的相对分子质量小且碱变性为单链,所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA向正极迁移,从而形成彗星状图像,而未受损伤的DNA部分则保持球形。
因此,可根据电泳缓冲液PH值不同,进一步分为中性彗星试验(PH=8.4)和碱性彗星试验(PH>13),前者主要用于检测DNA双链的断裂损伤,后者则具有更高的灵敏性,可用于检测更少量的单链和双链的断裂损伤。
通常,DNA受损越严重,其产生的断链和断片就越多,长度也越小,在相同电泳条件下迁移的DNA量就越多,迁移距离也越长。因此,可通过测定DNA迁移部分的光密度或长度来判定单个细胞的DNA损伤程度,从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。
阴性对照
阳性对照
二、IPHASE产品
IPHASE作为体外研究生物试剂引领者,针对碱性彗星试验成功开发彗星试验试剂盒及其相应载玻片,省去了客户溶液配制时间,大大缩短了试验周期,且试剂盒各组分均经过严格的质量检测和多次试验验证,符合碱性彗星试验要求。
产品名称 规格
彗星试验试剂盒 20/50 Test
彗星试验载玻片,2孔 2/25 张
便捷性
提供单细胞凝胶电泳所需试剂和耗材,可以直接使用,大大缩短了实验周期。
准确性
试剂盒各成分均经过严格的质量检测,实验结果准确、可靠、重现性高。
稳定性
本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。
应用广
应用范围广,可用于食品、化学品、农药、消毒剂、食品添加剂、化妆品、医疗器械等多个方面的遗传毒理学检测。
IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验,推出了多领域、多种类的高端科研试剂,为药物早期研发提供筛选工具,为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段,为遗传毒性研究提供便捷产品。此外,IPHASE/汇智和源可提供特殊产品的定制服务,望广大科研工作者来电咨询,咨询热线400-127-6686。
发 文 章 得 奖 励
凡使用本公司产品,在国内及国际刊物上发表论文(论文发表日起一年内),并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES/汇智和源生物技术(苏州)有限公司所有,即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同,给予不同金额奖品:
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